Новые направления в диагностике аллергических заболеваний

Аллергические реакции, в механизме развития которых задействован IgE, получили название «истинных» или IgE-опосредованных. В настоящее время на рынке имеется большой выбор тест-систем различного производства для определения аллерген специфических и общего IgE количественным или полуколичественным методом на основе ИФА или хемилюминесцентного MAST-теста, что позволило частично отойти от традиционных тест-систем. Количественный метод хорошо отработан для определения общего IgE. При полуколичественном методе аллерген специфические IgE оцениваются по классам в зависимости от интенсивности реакции (1 класс –низкая интенсивность; 2 класс – средняя; 3-высокая; 4 класс – очень высокая). Интенсивность реакции 1 класса не учитывается, как положительный результат.

MAST-тест (фирма «Люминери»), по мнению многих исследователей, более специфичен, позволяет быстрее получить результаты исследования, можно определять параметры даже у 1 больного, не ожидая набора проб. Одним из примеров количественного метода являются тест-системы фирмы «Биохиммак», когда с помощью построения калибровочной кривой можно определить количественные параметры аллерген специфических IgE.

Результаты кожных проб не всегда совпадают с результатами определения специфических IgE, что связывают с более сложными механизмами формирования кожной реакции. Параллельные исследования результатов кожных проб и MАSТ-теста показывают довольно высокую корреляцию по данным Л.А.Горячкиной и А.С.Демборинской (таблица).



Корреляция результатов кожных проб и MAST-теста

Аллергены	Положительные результаты кожных проб	Положительные результаты  MAST-теста	% положительных результатов MAST-теста к результатам кожных проб
Шерсть животных	22	20	90,9%
Клещ Dermatho-phagoides	18	16	88,8%
Грибы	7	4	57,14%
Пыльца деревьев	16	15	93,7%
Пыльца злаковых трав	13	13	100%
Пыльца сорных трав	11	10	90,9%
Пищевые	12	7	58,3%

Из данных таблицы видно, что несоответствие результатов кожных проб и MAST-теста касается грибковых и пищевых аллергенов.

По данным исследования Института иммунологии ложноположительные результаты при применении MAST-теста отмечались только в 6,4% случаев, что может быть связано с перекрестно реагирующими аллергенами.

Особого внимания заслуживают контактные кожные тесты, стандартизированные международной группой авторов в 1967 год. Контактный дерматит относится к реакциям гиперчувствительности IV типа (гиперчувствительность замедленного типа) и в своем развитии проходит фазу индукции (сенсибилизации) и клинических проявлений. Роль аллергенов здесь могут выполнять низкомолекулярные белки, соли металлов, гаптены, лекарства. Сенсибилизированные Th1 (CD4+-клетки) вырабатывают гамма-интерферон (ИФН), что приводит к активации кератиноцитов, экспрессии HLA-DR, ICAM-1 АГ, выработке ИЛ-2 и других провоспалительных цитокинов, вазодилятации и развитию местного воспаления. При контактных кожных пробах химические соединения (аллергены, сульфат никеля, неомицин, формальдегид и т.д.) инкорпорированы на пластинках из геля (поливинилпирролидон, гидрооксипропилцеллюлоза), которые закрепляются на спине больного. Стандартная пластинка содержит 24 аллергена (фирма «Фармация»), действующая доза измеряется в мкг/см2. Разработаны специальные стрипы для контакта с жидкими аллергенами, растворенными в петриоляте или масле, воде и т.д. Например, при аллергическом дерматите результат (размер бляшки в месте контакта) стрипы снимают и измеряют результат через 48 часов контакта (- реакции нет; ± - только эритема; + - эритема и инфильтрация; ++ - эритема и не более 3-х папул; +++ - эритема и более 4-х папул; ++++ - эритема и большое количество выраженных папул; +++++ - эритема, пузырьки). Тест используется для диагностики у взрослых и детей. Время чтения результатов может варьировать от 48 часов до 7 дней (поздняя реакция). Истинная аллергическая реакция формируется через 72-96 часов.

В России были разработаны аппликационные и капельные пробы, когда на предварительно обработанную 70% спиртом кожу предплечья наносят каплю аллергена или кусочек марли, обработанной аллергеном.

Большое внимание уделяется диагностике IgG-опосредованных аллергических реакций (II и III тип реакции гиперчувствительности), часто в литературе обозначаемых термином пищевой или лекарственной непереносимости, в отличие от истинной IgE-опосредованной пищевой и лекарственной аллергии. Важную роль в формировании пищевой непереносимости к молоку, яйцам, рыбе играют IgG4-АТ. Формированию пищевой и лекарственной непереносимости способствует наличие заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ): гастрит, хронический холецистит, хронический панкреатит, колит, дисбактериоз кишечника. Определение IgG-АТ к пищевым продуктам методом ИФА (фирма «Биохиммак», «Аллергофарма») целесообразно также при рецидивирующей крапивнице, атопическом дерматите, с наличием сопутствующих заболеваний ЖКТ. При целиакии наблюдается пищевая непереносимость глютен-содержащих продуктов (белок глиадин). В механизме развития задействованы активированные Т-клетки, вырабатывающие ИЛ-2 и другие цитокины (гамма-ИФН, ФНО-альфа, ИЛ-1), синтезируются специфические IgG, M, A-АТ, что приводит к повышению про-ницаемости и повреждению слизистой, а в дальнейшем к развитию атрофии.

Псевдоаллергические реакции по клинической симптоматике могут быть сходны с истинными IgE-опосредованными реакциями, но отличаются по механизму развития. Их развитие не связано с выработкой АТ или участием сенсибилизированных лимфоцитов, в патогенезе этих реакций выделяют только две стадии – патохимическую и патофизиологическую.

При псевдоаллергических реакциях происходит неспецифическое высвобождение медиаторов: гистамина, лейкотриенов, простагландинов. Вещества, приводящие к высвобождению медиаторов получили название гистаминолибераторов: вещество 48/80, полиамины, вещества, в составе которых имеются NH-группы или алифатическая связь N-гексадефиламид, антибиотики (полимиксин), кальциевые ионофоры, фрагменты комплемента, кровезаменители, продукты жизнедеятельности гельминтов.

Для диагностики псевдоаллергических реакций предложены цитометрический аллерген стимулирующий клеточный тест (ЦАСК-тест) и клеточный тест высвобождения медиаторов (FLOW-CAST и EK-CAST). В 2002г. DeWeck A.L., Sanz M.L. показали, что при активации базофилов с помощью аллергена на их поверхности происходит экспрессия CD63 АГ (7). При ЦФСК-тесте (FLOW-CAST) используют двойную метку, выделяют лейкоциты и инкубируют их со стимулирующим буфером и аллергеном, анти IgE МАТ с флюоресцентной меткой для идентификации базофилов, после чего добавляют CD63 МАТ и на поверхности базофилов определяют экспрессию CD63 АГ методом проточной цитометрии. Например, для пищевых и ингаляционных аллергенов тест считается положительным при экспрессии CD63 на поверхности 15% базофилов; для ядов насекомых - 10%; бета-лактамных антибиотиков и анальгетиков- 5% базофилов и индекс стимуляции  2. Индекс стимуляции равен отношению %CD63+-базофилов в пробе с аллергеном к количеству этих клеток в пробе без аллергена. ЦФСК-тест (FLOW-CAST) был разработан Buhlmann laboratories. Его аналог BASOTEST разработан фирмой Beckton-Dickinson. ЦАСК-тест специфичен для определения IgE-опосредованной аллергии к ингаляционным аллергенам (кожные пробы нельзя проводить), пыльцевым, лекарствам, бета-лактамным антибиотикам, миорелаксантам, анальгетикам, аллергии к латексу, укусам перепончатокрылых насекомых, псевдоаллергических реакций к противовоспалительным нестероидным препаратам, индуцированным компонентами комплемента, плазмой, опаределение аутоантител к IgE. Результаты ЦАСК-теста (FLOW-CAST) хорошо коррелируют с результатами кожных проб.

Клеточный тест высвобождения медиаторов (ЕК-CAST) основан на определении сульфолейкотриенов (LTC4, LTD4, LTE4), продуктов распада арахидоновой кислоты, трансформированного 5-липогеназой и глютатион-С-трансферазой после воздействии аллергенов на клетки. Сульфолейкотриены могут синтезироваться базофилами, тучными клетками, макрофагами, эозинофилами, почечными мезенгиальными клетками не только при IgE-опосредованных аллергических реакциях, но и при воспалительных процессах, лекарственной и пищевой непереносимости, псевдоаллергических реакциях. Синтезированный клетками LTC4 метаболизирует до образования LTD4 и LTE4.

Сульфолейкотриены могут определяться в различных биологических жидкостях методом ИФА. Тест считается положительным для пищевых, ингаляционных аллергенов, латекса, ядов насекомых при определении уровня лейкотриенов 200пкг/мл; для лекарственных аллергенов, а также пищевых и химических добавок  40пкг/мл.

Оба теста высоко специфичны для диагностики пищевой аллергии и непереносимости, ингаляционной аллергии, когда кожные тесты не могут быть использованы, аллергии на латекс, на укусы перепончатокрылыми насекомыми, аллергии у детей, лекарственной аллергии и непереносимости, различных псевдоаллергических реакций.

Могут быть использованы одновременно оба теста (CAST-COMBI) для диагностики лекарственной аллергии, пищевой и лекарственной непереносимости, псевдоаллергических реакций, когда сульфолейкотриены определяют в надосадочной жидкости, а на базофилах – экспрессию CD63 АГ.

Применение ЦАСК-теста и клеточного теста высвобождения медиаторов в диагностике пищевой аллергии и непереносимости, псевдоаллергических реакций может быть использовано для составления гипоаллергенной и элиминационной диеты.

Применение современных методов диагностики позволяют расширить наши представления о патогенезе аллергических заболеваний и создают новые возможности качественного и эффективного лечения.

 

Литература.

1. Бельмер С.В. Целиакия. РМЖ, 1996, т. 4, № 3.
2. Горячкина Л.А., Демборинская А.С. Определение общего и специфического IgE в сыворотках крови аллергических больных методом хемилюминесценции на аппарате MAST-CLA компании «ЛЮМИНЕРИ» Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. Материалы симпозиума «Новейшие методы диагностики аллергии» (29-31 мая 2001г., Москва), с.13-17.
3. Клиническая аллергология. Под редакцией академика РАМН, проф. Р.М.Хаитова, Москва, “МЕДпресс-информ”, 2002, 623с.
4. Лусс Л.В. Сравнительная оценка диагностической значимости разных методов специфической аллергодиагностики у больных с атопическими заболеваниями. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. Материалы симпозиума «Новейшие методы диагностики аллергии» (29-31 мая 2001г., Москва), с.7-8.
5. Abuaf N., Rajocly B., Ghazouani E. et al. Validation of flow cytometry assay detecting in vitro basophil activation for the diagnosis of muscle relaxant allergy. J. Allergy Clin. Immunol., 1999, v.104, P.411-418.
6. Almqvist C., Pershagen G., Wickman C.M. Socioeconomic status and risck of asthma and sensitisation at four years in a birth cohort. Abstract book of XXIII EAACI Congress, 12-16 June 2004, Amsterdam, Editors: Roy Gerth van Wijk at al., 2004, N. 961, P. 283.
7. De Weck A.L., Sanz M.L. Flow cytometric cellular allergen stimulation test. Technical and clinical evaluation of a new diagnostic test in allergy and pseudo-allergy. ACI International, 2002, 14 (5), P.204-215.
8. Emenius G.E., Wickman C.M. Indoor environment and asthma in children at four years of age: Data from the Bamse birth cohort. Abstract book of XXIII EAACI Congress, 12-16 June 2004, Amsterdam, Editors: Roy Gerth van Wijk at al., 2004, N. 52, P. 22.
9. Gamboa P.M., Sanz M.L., Garcia-Aviles C. et al. Flow-cytometric cellular allergen stimulation test to assess basophil activation in allergic patients to betalactam antibiotics with positive and negative skin test. Allergy, 2001, 56 (Suppl. 68), P.5.